HPLC法测定复方制剂厄贝沙坦氢氯噻嗪片有关物质-辽宁化工2022年01期

摘      要：目的：建立厄贝沙坦氢氯噻嗪片有关物质检测方法。方法：采用Phenomenex Luna® 3μm CN 100A（4.6 mm×150 mm，3 μm）为色谱柱;以0.01 mol·L^-1的磷酸二氢钾缓冲液（取磷酸二氢钾1.36 g，加水1 000 mL溶解，加入2 mL三乙胺，用磷酸调节pH值至3.0）为流动相A，以甲醇-乙腈（5∶1）为流动相B，线性梯度洗脱0～5 min，流动相B 18%;5～22min，流动相B 18%～45%;22～27 min，流动相B 45%;27～28 min，流动相B 45%～18%;流速为1.0 mL·min^-1，检测波长为220 nm。结果：各已知杂质在限度质量分数10%～200%范围内线性关系良好，r≥0.999 9，各杂质及主峰与相邻杂质分离良好;各已知杂质的回收率在98.0%～110.6%范围内，RSD均小于2.0%（n=12）;溶液在24 h内稳定;精密度和重复性RSD均小于5.0%。结论：方法精密度好、准确度高，可用于本品的有关物质检测。

关  键  词：厄贝沙坦氢氯噻嗪片;有关物质;高效液相色谱仪法（HPLC）

中图分类号：O657.7     文献标识码： A     文章编号： 1004-0935（2022）01-0146-03

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高血压是危害人类健康的常见的心血管疾病之一，心脏和血管是高血压的主要靶器官，长期高血压可影响重要脏器尤其心、脑、肾的结构和功能，最终导致这些器官的功能衰竭，迄今仍是心血管疾病死亡的主要原因之一^[1-3]。厄贝沙坦氢氯噻嗪片是血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦和利尿剂氢氯噻嗪的复方制剂，具有协同降压的效果，且能够互相补充不足，减少或抵消单药长期用药可能出现的不良反应，从而增加患者服药的顺应性。

为能使两种主药与杂质有效分离，又能节约分析时间，亟须建立一种检测方法对其进行控制。目前，厄贝沙坦氢氯噻嗪片进口注册标准及美国药典标准^[4]记载了厄贝沙坦氢氯噻嗪片有关物质检测的方法，但该两种方法中的氢氯噻嗪及其杂质保留时间过于提前，与溶剂峰存在干扰。因此，建立一个检测厄贝沙坦氢氯噻嗪片及其杂质的方法具有非常重要的意义^[5-9]。

1  仪器与试药

1.1  仪器

Thermo U3000高效液相色谱仪（美国Thermo Fisher Scientific公司），色谱工作站：ChromeLeon7.0;Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司），色谱工作站：Openlab;ME36S电子分析天平（德国SARTORIUS公司）。

1.2  试药

供试品（厄贝沙坦氢氯噻嗪片，南京正大天晴制药有限公司，批号：Y160521），对照品（厄贝沙坦，中国食品药品检定研究院，批号：100607-201202;氢氯噻嗪，中国食品药品检定研究院，批号：100309-201404;厄贝沙坦杂质A，USP，批号：GOL314;氢氯噻嗪杂质A，USP，批号：JOL279），甲醇、乙腈、磷酸均为色谱级，磷酸二氢钾为分析纯，水为自制超纯水。

2  方法与结果

2.1  色谱条件

色谱柱：Phenomenex Luna® 3 μm CN 100A（4.6 mm×150 mm，3 μm）;流动相：以0.01 mol·L^-1的磷酸二氢钾缓冲液（pH3.0±0.1）为流动相A，以甲醇-乙腈（5∶1）为流动相B，按下表进行梯度洗脱;流速：1.0 mL·min^-1;柱温：25 ℃;进样量：10 µL。

2.2  溶液的制备

空白溶剂：甲醇-磷酸溶液（pH2.0）（取纯化水适量，用磷酸调节pH值至2.0）（70∶30）。

厄贝沙坦有关物质A对照品贮备液：每1 mL中约含厄贝沙坦有关物质A135 mg的溶液。

氢氯噻嗪有关物质A对照品贮备液：每1 mL中约含氢氯噻嗪有关物质A37.5 mg的溶液。

厄贝沙坦对照品贮备液：每1 mL中约含厄贝沙坦450 mg的溶液。

氢氯噻嗪对照品贮备液：每1 mL中约含氢氯噻嗪37.5 mg的溶液。

供试品溶液：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于厄贝沙坦150 mg），置100 mL量瓶中，加磷酸溶液（pH2.0） 30 mL，超声30 min后，加甲醇60 mL，超声15 min后，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液15 mL，置50 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。同法制备空白辅料溶液。

系统适用性溶液：取厄贝沙坦对照品贮备液1 mL、厄贝沙坦有关物质A对照品贮备液0.1 mL、氢氯噻嗪对照品贮备液1 mL、氢氯噻嗪有关物质A对照品贮备液1 mL，置同一10 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3  专属性

2.3.1  系统适用性试验

精密量取空白溶剂、空白辅料、系统适用性溶液及供试品溶液各10 mL，注入液相色谱仪，记录色谱图。空白溶剂和空白辅料均不干扰杂质检测;杂质与杂质之间、杂质与主成分之间均能有效的分离，该方法的专属性良好。

2.3.2  破坏试验

本品经过酸（1 mol·L^-1盐酸溶液，80 ℃水浴放置2 h）、碱（1 mol·L^-1氢氧化钠溶液，40 ℃水浴放置0.5 h）、氧化（30% H₂O₂10 mL，80 ℃水浴放置2 h）和高温（105 ℃，48 h）破坏后，取破坏后溶液各10 mL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果显示，本品在氧化、酸、碱强制降解条件下均会发生不同程度的降解，其中酸破坏主要降解产生氢氯噻嗪有关物质A和厄贝沙坦有关物质A，碱破坏主要降解产生厄贝沙坦有关物质A，氧化破坏破坏主要降解产生氢氯噻嗪有关物质A。峰纯度均高于998;主峰与相邻杂质峰分离良好;物料平衡率均在90%～110%之间，物料基本守恒。

2.4  线性关系

取各杂质对照品贮备液，用溶剂配制成相当于限度质量分数10%～200%的线性系列溶液。精密量取上述系列浓度溶液10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，进行线性回归分析。厄贝沙坦有关物质A回归方程为y = 1.649 5×10^-3x +1.823 6×10¹，r=0.999 9;氢氯噻嗪有关物质A回归方程为y = 6.502 8×10^-4x +8.755 9，r=0.999 9;厄贝沙坦回归方程为y = 1.435 1×10^-3x +4.621 0×10¹，r=0.999 9;氢氯噻嗪回归方程为y = 7.656 3×10^-4x +5.166 8，r=1.000 0;表+jHUI6k6Opu4FYRuD9z0Dg==明各杂质在限度质量分数10%～200%范围内，具有良好的线性关系。

2.5  检测限与定量限

取各对照品贮备液适量，逐级稀释，分别精密量取溶液10 μL进样分析，厄贝沙坦有关物质A的检测限为0.14 ng，氢氯噻嗪有关物质A的检测限为0.03 ng;厄贝沙坦有关物质A的定量限为0.43 ng，氢氯噻嗪有关物质A的定量限为0.08 ng。

2.6  回收率

取本品细粉适量（约相当于厄贝沙坦75 mg），平行9份，平均分成三组，加入杂质对照品贮备液各适量，使供试品溶液中含各已知杂质的含量分别为限度质量分数的50%、100%及150%。按外标法计算各杂质的含量，计算回收率，各杂质的回收率均在98.0%～110.6%，RSD均小于2.0%（n=9），该方法的准确度良好。

2.7  重复性

计算平行6份供试品溶液中单个杂质与总杂的含量，结果氢氯噻嗪有关物质A平均质量分数为0.20%，RSD为2.9%（n=6）;未知单杂平均质量分数量为0.03%，RSD为2.3%（n=6）;总杂平均质量分数为0.23%，RSD为2.8%（n=6），该方法的重复性良好。

2.8  耐用性

适当调整色谱条件参数（流动相比例、流动相pH值、柱温、波长、流速），系统适用性溶液各峰间分离度均大于1.5，供试品中杂质检测结果基本一致，可见方法耐用性良好。

3  讨论

3.1  检测波长的选择

厄贝沙坦、厄贝沙坦有关物质A、氢氯噻嗪和氢氯噻嗪有关物质A在220 nm波长处均有较强吸收，选择220 nm作为本品有关物质的检测波长。

3.2  色谱条件的选择

进口注册标准（JX20050278）和厄贝沙坦氢氯噻嗪片USP标准中有关物质检测条件下，杂质出峰较早，溶剂峰对杂质检测产生干扰，杂质之间分离也产生干扰。在USP标准和进口注册标准有关物质检测方法的基础上对流动相洗脱程序进行优化，优化后的方法各杂质分离度良好。

4  结束语

本研究中厄贝沙坦氢氯噻嗪片有关物质检测能达到理想的分离效果，对方法的专属性、灵敏度、精密度和耐用性进行了评价。该方法简便、准确，可用于厄贝沙坦氢氯噻嗪有关物质检测，为合格的厄贝沙坦氢氯噻嗪的生产提供了有效的质控方法。

参考文献：

[1]黄伟. 厄贝沙坦氢氯噻嗪片用于高血压治疗的临床效果分析[J].特别健康，2021（29）：283.

[2]杨雪. 厄贝沙坦氢氯噻嗪片治疗高血压的临床效果[J]. 健康之友，2021（5）：269.

[3]吕红震. 厄贝沙坦氢氯噻嗪片治疗高血压的临床疗效[J]. 中国保健营养，2021，31（21）：172.

[4]美国药典委员会.美国药典：USP43-NF38[S].美国：2404.

[5]邹春阳，王凤秋，夏平. HPLC法测定依折麦布中有关物质[J]. 辽宁化工，2014，43（8）：1089-1091.

[6]夏平，邹春阳，孟祥军. 双氯芬酸钾软胶囊有关物质检测[J]. 辽宁化工，2018，47（3）：204-206.

[7]赵迎春，韩继永. HPLC法测定卡巴他赛的有关物质[J]. 辽宁化工，2017，46（12）：1225-1228.

[8]周波，邹春阳，庞小琳，等. HPLC法测定双氯芬酸钾中有关物质[J]. 辽宁化工，2012，41（3）：322-324.

[9]王凤秋，邹春阳，孟祥军. HPLC法测定阿莫西林钠克拉维酸钾有关物质[J]. 辽宁化工，2012，41（5）：537-538.

Determination of Related Substances of Irbesartan and Hydrochlorothiazide Tablets by HPLC

ZHAO Cui， XV Bao-yan， LAN Gong-jian

（Nanjing Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co.， Ltd.， Nanjing Jiangsu 210046， China）

Abstract： A HPLC method for the determination of the related substances of Irbesartan and Hydrochlorothiazide Tablets was established. The column was Phenomenex Luna® 3 μm CN 100A （4.6 mm×150 mm，3 μm）， with the mobile phase A of 0.01 mol·L^-1 potassium dihydrogen phosphate （adding 2 mL trimethylamine to the 1 000 mL solution， and adjusting the pH to 3.0 with phosphoric acid）， and the mobile phase B of methanol-acetonitrile （5∶1）. The linearity gradient elution was as follows： 0～5 min， mobile B 18%; 5～22 min， mobile B 18%～45%; 22～27 min， mobile B 45%; 27～28 min， mobile B 45%～18%. The flow rate was 1.0 mL·min^-1， and the detection wavelength was 220 nm. The good linearity for related substances was obtained over the range of  10%～200%（r≥0.999 9）. The main substance and its impurities could be well separated. The recovery of related substances was 98.0%～110.6% （RSD<2.0%， n=12）. The solution was stable within 24 h， and the RSDs of precision and repeatability were less than 5.0%. The method has good precision and high accuracy， and can be used for the detection of related substances in Irbesartan and Hydrochlorothiazide Tablets.

Key words： Irbesartan and Hydrochlorothiazide Tablets; Related substances; HPLC