Clinimix E（克灵麦）中色氨酸杂质M的测定-辽宁化工2022年06期

摘      要：目的：建立Clinimix E（克灵麦）中氨基酸注射液色氨酸杂质M的测定方法。方法：采用HPLC法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸二氢钠缓冲液（取磷酸二氢钠约3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加2.9 g·L^-1磷酸溶液1 000 mL，以磷酸调节pH值至2.3）-乙腈=88.5∶11.5为流动相A，以磷酸二氢钠缓冲液（pH2.3）-乙腈=65∶35为流动相B，采用梯度洗脱，流速为每分钟0.7 mL;检测波长为220 nm;柱温为40 ℃。结果：在0.202 8～4.056 0μg·mL^-1范围内，色氨酸杂质M的浓度与峰面积之间线性关系良好;该方法的重复性和准确度的 RSD 值分别为0%、0.2%。结论：该方法专属性、重现性、准确度良好，可用于Clinimix E（克灵麦）中氨基酸腔袋色氨酸杂质M的测定。

关  键  词：色氨酸杂质M;HPLC法;氨基酸注射液

中图分类号：TQ46     文献标识码： A     文章编号： 1004-0935（2022）06-0878-03

肠外营养（parenteral nutrition，PN）是从静脉内供给营养作为手术前后及危重患者的营养支持，包括热量（碳水化合物、脂肪乳剂）、必需和非必需氨基酸、维生素、电解质及微量元素。肠外营养目的是使病人在无法正常进食的状况下仍可以维持营养状况、体重增加和创伤愈合，幼儿可以继续生长、发育^[1-6]。

Clinimix E（克灵麦）是专为肠外营养设计的即用型双室袋产品，含5.5%氨基酸、10%的葡萄糖以及各种可溶性电解质，为机体提供蛋白质原料、碳水化合物热卡及电解质。Clinimix E（克灵麦）含15种左旋氨基酸，其中8种系人体必需氨基酸，氨基酸是构成蛋白质的基本单位，用于合成蛋白质和其他生物分子，或者氧化为尿素和二氧化碳提供能量。其中的色氨酸为不稳定氨基酸，在高温、氧化条件下易降解出多种杂质，如犬尿氨酸、吲哚-3-甲醛、色氨酸杂质B、D、M等^[7-12]，通过对比美国药典、欧洲药典、英国药典及相关文献^[11-16]，本研究建立了一种高效液相色谱法检测制剂中色氨酸杂质M，为完善质量控制提供依据。

1  材料与方法

1.1  仪器与试剂

高效液相色谱仪（Agilent）、PB-10 pH计（Sartorius）、SQP电子天平（Sartorius）、色氨酸杂质M对照品（Sigma，批号：MKBK4239V）、磷酸二氢钠、乙腈。

1.2  供试品

Clinimix E（克灵麦）氨基酸腔袋药液（Baxter Healthcare Corporation，批号：P377481）。

1.3  实验方法

1.3.1  操作步骤

精密量取本品5 mL，置10 mL量瓶中，以10%乙腈稀释至刻度，作为供试品溶液;取杂质M对照品适量，精密称定，以10%乙腈溶解并稀释制成每1 mL中约含10 µg的溶液，作为杂质M对照品贮备液;精密量取对照品贮备液2 mL，置同一10 mL量瓶中，以10%乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Inertsil ODS-3 4.6 mm×250 mm，5 μm）;以磷酸二氢钠缓冲液（取磷酸二氢钠约3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加2.9 g·L^-1磷酸溶液1 000 mL，以磷酸调节pH值至2.3）-乙腈=88.5∶11.5为流动相A，以磷酸二氢钠缓冲液（pH2.3）-乙腈=65∶35为流动相B，进行梯度洗脱。流速为每分钟0.7 mL;检测波长为220 nm，柱温40 ℃。梯度洗脱程序见表1。

1.3.2  方法学考察

1.3.2.1  专属性

采用酸、碱、氧化、高温、光照等强烈破坏条件对供试品及阴性样品进行破坏，考察新增杂质是否干扰杂质M的检测，同时取空白溶剂进行对比考察。

1.3.2.2  线性

精密称取杂质M对照品适量，用10%乙腈溶解并稀释制成不同浓度的对照品溶液，进样考察。

1.3.2.3  重复性

按照1.3.1中操作步骤，制备对照品溶液和供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各注入液相色谱仪，记录色谱图，计算6份供试品溶液中色氨酸杂质M含量的相对标准偏差（RSD%）。

1.3.2.4  溶液稳定性

将杂质M对照品溶液及供试品溶液置室温条件下进行放置，分别于不同的时间点进样，考察样品溶液及对照品溶液的稳定性。

1.3.2.5  准确度

取杂质M对照品适量，精密称定，以10%乙腈溶解并稀释制成每1 mL中约含5 µg 的对照品溶液。取本品5 mL，9份，分别置10 mL量瓶中，分别加入对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL，制备3个浓度的样品，每个浓度平行制备3份样品。精密量取20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率和其相对标准偏差（RSD）。

2  结果与分析

2.1  专属性

采用酸、碱、氧化、高温、光照等强烈破坏条件对供试品及阴性样品进行破坏，产生的降解杂质与杂质M分离度良好，不干扰杂质M的测定;空白溶剂及阴性样品均不干扰测定，表明该色谱条件专属性良好。

2.2  线性

精密称取杂质M对照品适量，用10% 乙腈溶解并稀释制成不同浓度的对照品溶液，进样考察。记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算标准曲线方程。结果表明，色氨酸杂质M浓度在0.202 8～4.056 0 μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系，其线性方程为y=261.33x-3.65，r=0.999。色氨酸杂质M线性标准曲线见图1。

2.3  重复性

按照1.3.1中操作步骤，制备对照品溶液和供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各注入液相色谱仪，记录色谱图，计算6份供试品溶液中色氨酸杂质M含量的相对标准偏差（RSD%）为0，表明该方法重复性良好。重复性试验结果见表2。

2.4  溶液稳定性

取对照品溶液分别于0、4、8、12、27 h取样检测;取供试品溶液分别于0、4、8、16、24 h取样检测，记录色谱图，计算峰面积RSD，对照品溶液峰面积RSD为0.7%，供试品溶液峰面积RSD为2.0%。表明对照品溶液在27 h内、供试品溶液在24 h内稳定。溶液稳定性试验结果见表3。

2.5  准确度

取杂质M对照品适量，精密称定，以10%乙腈溶解并稀释制成每1 mL中约含5 µg 的对照品溶液。取本品5 mL，9份，分别置10 mL量瓶中，分别加入对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL，制备3个浓度的样品，每个浓度平行制备3份样品。精密量取20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率平均值为99.1%，RSD为0.2%。表明该方法回收率高，满足分析测定的要求。回收率试验结果见表4。

3  结 论

本试验建立了肠外营养制剂Clinimix E（克a839c0ff8e471b0a9fe2e9ed6aba9151692751b96a83e7e921d488a52c3f197e灵麦）中氨基酸注射液色氨酸杂质M的测定方法。采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，磷酸盐-乙腈缓冲系统为流动相进行梯度洗脱。

试验结果表明，在酸、碱、氧化、高温及光照条件下破坏后产生的降解产物对色氨酸杂质M的测定均无干扰，方法专属性好、线性范围广且重现性好，为Clinimix E（克灵麦）及同类复方氨基酸注射液中色氨酸杂质M测定提供参考。

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Determination of Tryptophan Impurity M Content in Clinimix E

WU Hui-bin JIANG Ling-juan

（1. Liaoning Haisco Pharmaceutical Co.， Ltd.， Xingcheng Liaoning 125100， China;

2. Liaoning Haisco Pharmaceutical Co.， Ltd. Shenyang Branch， Shenyang Liaoning 110179， China）

Abstract：  A method for determination of tryptophan impurity M in amino acid injectionof Clinimix E. was established. HPLC was used to determine， octadecylsilane silica gel was used as filler， sodium dihydrogen phosphate buffer （pH=2.3）-acetonitrile（volume ratio 88.5∶11.5） was used as mobile phase A， sodium dihydrogen phosphate buffer （pH=2.3）-acetonitrile（volume ratio 65∶35） was used as mobile phase B， gradient elution was adopted， the flow rate was 0.7mL·min^-1，the detection wavelength was 220 nm，the column temperature was 40 ℃. The results showed that， there was good linear relationship between the mass concentration of tryptophan impurity M and the peak area method at the range of 0.202 8～4.056 0 μg·mL^-1. The RSD values for the repeatability and accuracy of the method were 0 and 0.2%， respectively. The method has good specificity， reproducibility and accuracy， and can be used for the determination of tryptophan impurity M content in Clinimix E.

Key words： Tryptophan impurity M; HPLC; Aminic acid injection